• 搜索???Search
    聯系我們???Contact
    你的位置:首頁 > 新聞動態 > 行業新聞

    血清分離實驗哪能少的了它

    發布時間:2021-3-31 18:30:55??????點擊:

      離心機被廣泛應用于血清分離實驗。

      血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白組成,各行使其重要的功能。

      血液完全凝固和離心條件是至關重要的兩個環節,離心要求采用水平式離心機。具體操作步驟是:采血后立即輕輕倒轉采血試管4~5次混勻標本,等待標本充分凝固需要放置30min,離心半徑200px,離心機離心速度維持在3500~4000r/min離心10min。血清與血凝塊完全被分離膠分離,血清標本可直接上機檢測或轉移至儀器配套試杯中。具備這個條件才能制備出高品質血清標本,說明分離膠效果好。

      鹽析后蛋白質沉淀經水溶后,特點是保持蛋白質生物學活性,因此,鹽析法是研究蛋白質分子的結構和功能的最常用方法。除鹽析法,有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法、柱層析法和超速離心法等也是蛋白質分離的常用方法。

      實驗器材和試劑

      1.器材:10ml具塞刻度試管、離心機、離心管、小試管、5ml吸管、滴管2支、培養皿3套、醋酸纖維薄膜、點樣器、電泳槽、電泳儀、1.0×20cm層析柱。

      2.試劑:

      (1) 葡聚糖凝膠Sephadex G-25:稱10g SephadexG-25,加200ml 0.02mol/L pH6.5磷酸鹽緩沖液溶脹24小時。

      (2) 生理鹽水:稱取分析純NaCl  0.89g,蒸餾水稀釋至100ml。

      (3) 飽和硫酸銨溶液:25℃時稱取(NH4)2SO4約767g,溶解至1000ml蒸餾水中,至不能完全溶解為止,即為飽和硫酸銨溶液。

      (4) 巴比妥緩沖液(pH 8.6):稱取巴比妥鈉15.458g.巴比妥2.768g,蒸餾水定容至1000m1。

      (5) 氨基黑10B染色液:稱取氨基黑10B 0.5g,加入100ml漂洗液不斷振搖,直到完全溶解。

      (6) 漂洗液:取95%乙醇450ml,冰醋酸100m1,混勻后,用蒸餾水稀釋到l000ml。

      鹽析沉淀蛋白質:

      取10 m1具塞刻度試管1支,加入血清溶液 2.5ml,緩慢加進等量飽和(NH4)2SO4溶液,充分搖勻,見有沉淀析出,靜置10min,用雙層濾紙過濾,棄去沉淀,取濾液。

      蛋白質分子能穩定存在于水溶液中是因為有兩個穩定因素:水化膜和表面電荷。當維持蛋白質的穩定因素破壞時,蛋白質分子可相互聚集沉淀而析出,蛋白質分子沉淀析出的方法很多,根據對蛋白質穩定因素破壞的不同有中性鹽析法、有機溶溶劑法、重金屬鹽法以及生物堿試劑法等。鹽析法是以中性鹽如硫酸銨((NH4)2SO4)等對蛋白質作用破壞蛋白質表面水化膜而使蛋白質相互聚集而析出。不同的蛋白質沉淀需要的中性鹽濃度不同,在不同鹽濃度下,蛋白質溶解度不同。球蛋白在半飽和狀態下發生沉淀,而請蛋白在完全飽和狀態下沉淀,利用此特性可把蛋白質分段沉淀下來,此種鹽析法稱分段鹽析。

      此次實驗注意事項:

      1、只有經過嚴格培訓的人員才能進行離心機操作。

      2、操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。

      3、規范的實驗操作技術可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產生。血液和血清應當小心吸取,而不能傾倒。嚴禁用口吸液。

      4、移液管使用后應完全浸入適當的消毒液中。移液管應在消毒液中浸泡適當的時間,然后再丟棄或滅菌清洗后重復使用。

      5、帶有血凝塊等的廢棄標本管,在加蓋后應當放在適當的防漏容器內高壓滅菌和/或焚燒。

      6、應備有適當的消毒劑來清洗噴濺和溢出標本。


    48.3K
    客服胡經理
    客服余經理
    客服徐經理
    網頁在線咨詢
    bg西游捕鱼相关网站大全